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PROBLEMAS TEMA 3.  <>

1.- ¿Cuál será la actividad específica del 14C puro en Ci.g-1?.  <>

2.- Una muestra de [14C]glucosa se midió en un contador de radiactividad, obteniéndose 2215 cpm. ¿Cuál es la eficacia del contaje si la muestra contenía 10 nCi?.

3.- Una muestra que contiene 131I posee una actividad de 10000 dpm. Al cabo de diez días el contaje de la muestra en el mismo contador proporcionó un valor de 4250 dpm. ¿Cuál es la constante de desintegración del 131I?.

<>4.- El contaje de una muestra de [14C]leucina en un contador de centelleo líquido ha proporcionado un valor de 6497 cpm. El contaje previo del vial con líquido de centelleo, pero sin muestra, en las mismas condiciones, rindión 37 cpm. ¿Cuál es la actividad neta de la muestra de [14C]leucina?.  <>

5.- En un contador de centelleo líquido se ha determinado la actividad de una muestra de [14C]acetil-CoA?. el valor obtenido fue de 14987 cpm. ¿Cuál es la actividad real de la muestra si el fondo del contaje es de 40 cpm?. (Tiempo muerto del contador: 10 µseg.).  <>

6.- A 2,5 mg de un hidrolizado de proteína se le añaden 0,9 mg de [14C]glicocola con una actividad específica de 20000 cpm.mg-1. De la mezcla se urifica la fracción de glicocola, resultando ser su actividad específica de 12500 cpm.mg-1. ¿Cuál es el contenido, en tanto por ciento, que de este aminoácido presenta dicha proteína?. Se acepta que no existen péridas en la purificación de la fracción de glicocola.  <>

7.- La determinación de la constante de asociación del ligando A a la proteína X se ha llevado a cabo por experimentos de equilibrio de diálisis. En todos los experimentos se ha utilizado una concentración fija de proteína de 15 mg.ml-1, variándose únicamente la concentración de ligando.  A la vista de los resultados obtenidos que se recogen en la tabla, dedúzcase la constante de asociación del complejo (AX). El peso molecular de la proteína es de 15000 dalton.<> La actividad específica de A es de 60000 cpm.µmol-1

Exp. nº   (cpm.ml-1)lado proteína-(cpm.ml-1)lado tampón            (cpm.ml-1)lado tampón

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   1                              17989                                                             199986

   2                              26100                                                             401010

   3                              38001                                                             800801

 

                                   A  +   X              AX                   K =  [AX]/[A].[X]

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8.- Una muestra de ácido [14C]α-cetoglutárico sufre las transformaciones químicas expuestas en el esquema siguiente, en el que se incluyen las actividades específicas en cpm.µmol-1 del desprendido en cada paso. Determínese el marcaje isotópico del complejo estudiado. <>  

Nota: Para determinar la actividad del CO2 desprendido, éste se precipita como CO3Ba.

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9.- En un experimento  para medir la síntesis de DNA, ¡qué sería preferible, utilizar [3H]timidina o [32P]timidina?. ¿Por qué?. 

<>10.- Supóngase que se dispone de un contador Geiger con una eficiencia de un 22% para el 14C y un ruido de fondo de 6 cpm, y de un contador de centelleo con una eficiencia del 72% para el 14C y un ruido de fondo de 38 cpm. En un experimento con 14C se espera que la muestra tenga una actividad muy baja, es decir, de 75 a 100 cpm. ¿Qué contador debería utilizarse?. ¿Por qué?. 

<>11.- El 32P tiene un semiperiodo de 14,3 días. Determínese el valor de su constante de desintegración y el porcentaje inicial que queda al acabo de 15, 25 y 50 días en una muestra de este radioisótopo.  <>

12.- ¿Cuál será la actividad específica máxima de la [14C]glucosa?. (Masa molecular: 192; semiperiodo del 14C: 5700 años).  <>

13.- Con objeto de determinar el volumen de sangre de un ave se le inyectaron 2 ml de una suspensión de eritrocitos marcados radiactivamente con una actividad de 1,77 x 107 cpm/ml. Tras cinco minutos se aisló una pequeña muestra de sangre del animal, obteniéndose en ella una actividad de 1,5 x 105 cpm/ml. Determínese el volument sanguíneo del ave estudiada.  <>

14.- En la determinación del aminoácido N-terminal de una proteína que consta de dos cadenas polipeptídicas idénticas se utilizó cloruro de [14C]dansilo (0,1 µCi/µmol). La reacción se llevó a cabo con 100 mmol de proteína. Mediante una cromatografía se aisló el dansilaminoácido N-terminal en un volumen de 2 ml. Una alícuota de 0,1 ml de éste proporcionó una actividad de 1385 cpm en un contador de centelleo líquido. Calcúlese el rendimiento de la reacción, sabiendo que la eficacia del contaje es del 80%.  <>

15.- Para la carboximetilación de una proteína se ha utilizado yodo[14C]acetato (1 mCi/mmol). Teniendo en cuenta que la proteína contiene cinco residuos de cisterna y que la reacción precisa un exceso dos veces molar de yodoacetato, ¿cuántos mCi de yodo[14C]acetato se precisarán para carboximetilar 1 mmol de proteína?.¿Cuál será la actividad específica de la proteína?. Considérese que en la reacción sólo se modifican las cisteínas.