<>TEMA 1-Bis
1.1- Razónese cuál será el orden de elución de la mezcla artificial de hemoglobinas mutantes de la cadena a, J (Toronto), I, O (Indonesia) y A en una cromatografía de cambio de ión en carboximetilcelulosa (CM-celulosa), un cambiador catiónico, sabiendo que

 

Hb A

 

                        Hb J                           Asp                 Ala

                        Hb I                            Glu                  Lys

                        HbO                           Lys                 Glu

 

1.2  Se desea separar la siguiente mezcla de proteínas:

  Albúmina de Suero ( 68000 ± 3000 ), Catalasa ( 240000 ± 10000 ), Citocromo c ( 12400 ) y b-galactosidasa ( 520000 ± 10000).
¿Qué tipo de Sephadex se puede utilizar?. ¿Cuál será el orden de elución?.

 

1.3              En una columna de Sephadex G-25 equilibrada con tampón fosfato 10 mM, pH 7,5 se carga una proteína disuelta en tampón fosfato potásico 1 M, pH 7,5, y cuyo peso molecular es de 240000 dalton. La elución se lleva a cabo con el tampón en el que está equilibrada la columna. ¿A qué volumen eluirá la proteína?.¿A qué molaridad cabe esperar obtener la proteína?.¿Como se explica un gráfico de absorción en el que aparezca el pico de la proteína y otro pico de menor área a mayor volumen de elución si la proteína estaba pura?.

 

NOTA:                                                          Rango de fraccionamiento

 

                                   Péptidos y proteína globulares                    Dextranos

 

Sephadex G-10                                 -           700                                         -           700

Sephadex G-15                                 -        1500                                          -         1500

Sephadex G-25                      1000    -        5000                              100      -         5000

Sephadex G-50                      1500    -      30000                              500      -       10000

Sephadex G-75                      3000    -      70000                            1000      -       50000

Sephadex G-100                    4000    -     150000                           1000      -     100000

Sephadex G-150                    5000    -     400000                           1000      -     150000

Sephadex G-200                    5000    -     800000                           1000      -     200000